استخراج RAN – استخراج آر ای ان

استخراج RNA

استخراج RAN – استخراج آر ای ان

استخراج RAN

فرایند استخراج RNA  به این صورت است که طی آن RNA کل موجود در یک نمونه هموژنیزه شده سلولی جدا و تصفیه می‌شود. این روش آزمایشگاهی در بیوتکنولوژی، مهندسی ژنتیک و… کاربرد ویژه‌ای دارد و یکی از پیش نیازهای ضروری در فرآیندهایی همچون PCR و RT-PCR ، نورترن بلاتینگ و دیگر روشها می‌باشد.

مراحل استخراج RNA

روش‌های گوناگونی برای استخراج RNA وجود دارد که طی ۷ مرحله انجام می‌شود: ۱. برداشت بافت ۲. همگن سازی ۳. جداسازی فازها ۴. رسوب سازی ۵. شستشو  ۶. محلول سازی ۷. تجزیه و تحلیل

 

استخراج RNA

استخراج RNA

تفاوت استخراج RNA و DNA

روش استخراج DNA نمی‌تواند به طور مستقیم به RNA اعمال شود زیرا RNA به طور ساختاری خیلی متفاوت از DNA است. RNA یک رشته است، در حالی که DNA عمدتا دو رشته است. اغلب دشوار است که RNA دست نخورده را جداسازی کنیم. RNases، گروهی از آنزیم‌هایی که مولکولهای RNA را تجزیه می‌کنند، در محیط زیست فراوان هستند، از جمله در دست و روی سطوح، و RNases کاملا حذف / نابود کردن آن دشوار است. بنابراین جداسازی RNA مستلزم دستکاری محتاطانه نمونه‌ها و تکنیک‌های آسپتیک خوب است. مهم است که فقط از راه حل های RNase رایگان در طول استخراج، و همچنین نکات پاپت RNase و ظروف استفاده کنید.

خالص سازی DNA

DNA را می‌توان از طیف وسیعی از مواد از جمله خون، سلولهای مثانه فرو ریخته شده، نمونه‌های بافت منجمد و بلوکهای بافتی پارافین تهیه کرد. DNA در شرایط ذخیره مناسب و پایدار می‌تواند تهیه و ذخیره شود. استخراج DNA و تصفیه شامل سه مرحله اساسی است: شکستن سلولها برای بازتولید DNA، حذف لیپیدهای غشایی از طریق استفاده از مواد شوینده مناسب و رساندن DNA به الکل.

همچنین دو مرحله اختیاری وجود دارد که تقریبا همیشه قبل از مرحله رسوب انجام می‌شود. حذف پروتئین‌ها با افزودن پروتئاز مناسب و حذف RNA با استفاده از RNase. از طریق تلخیص DNA از نمونه‌های شما می‌توانید اختلال را از DNA‌های غیر هدف و سایر آلاینده‌ها به حداقل برسانید. ثبات نمونه را در ذخیره سازی بلند مدت افزایش دهید.

تصفیه RNA

از سوی دیگر استخراج و تصفیه RNA شامل چهار مرحله اساسی می شود. ابتدا باید سلولها را با اضافه کردن گوییدونی تیونیان و عامل کاهش دهنده به نمونه، و سپس آن را به تکان دادن شدید و یا vortexing، اعمال کنید. این مرحله نیز اوراق قرضه disulfide را قطع و پروتئین‌های آلاینده موجود در نمونه را غیر فعال کنید.

پس از لیز شدن سلول، شما باید الکل فنل و کلروفرم ایزومیل را اضافه کنید تا نمونه RNA خود را از محلول جدا کنید. فاز آبی حاوی RNA با ارزش است بنابراین شما باید آن را در یک لوله جداگانه قرار دهید، آن را اضافه کنید و محلول را برای رسوب RNA خود سانترفیوژ کنید. پس از شستشو رسوب با اتانول ۷۵٪، هرگونه ناخالصی را از نمونه خود حذف کنید.

با این حال، مهم است که توجه داشته باشید که RNA نسبت به DNA بسیار پایدار است. بنابراین شما باید آن را قبل از استفاده از آن جدا کنید. مراقبت‌های ویژه نیز باید قبل، در طی و پس از فرایند انجام شود تا خلوص نمونه شما را تضمین کند. به یاد داشته باشید، حتی کوچکترین مقدار RNase می‌تواند کیفیت آن را به خطر بیاندازد. DNA و RNA نیز می‌توانند از یک نمونه بیولوژیکی مشابه با استخراج کل کربن اسید نوکلئیک جدا شوند و آن را به دو بخش تقسیم کنند. یکی از آنها با یک DNase 1 درمان می‌شود، در حالی که بخش دیگری با RNase A برای بازیابی RNA و DNA به ترتیب.

 

دستگاه میکروفیوژ آزمایشگاهی (Micro fuge) یکی از تجهیزاتی است که در پروسه استخراج RNA و DNA کاربرد دارد. دستگاه میکروفیوژ یکی از محصولات شرکت نسل امید پژوهش می‌باشد.

/ استخراج RNA / برچسب ها: ,

اشتراک نوشته

درباره نویسنده

دیدگاه

دیدگاهی وارد نشده است.

ارسال پاسخ

آدرس ایمیل شما منتشر نخواهد شد فیلدهای اجباری با علامت مشخص شده اند *